細胞培養基既是培養細胞中供給細胞營養和促使細胞生殖增殖的基礎物質,也是培養細胞生長和繁殖的生存環境。細胞培養基滅菌的方式分為高壓滅菌和膜過濾除菌,不同的培養基由于其營養成份不同,滅菌方式也可能不同。
細胞培養基的滅菌方式如下:
1、高壓滅菌
某些培養基(如MEM)可進行高壓滅菌,這類培養基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氫鈉,一般是在培養基高壓滅菌后才加入。另外可用耐高壓的谷氨酸鹽(如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺)代替L-谷氨酰胺??筛邏簻缇呐囵B基在121℃、15psi,15分鐘的條件下可達到滅菌效果及營養成分的最小損失,不需將滅菌時間延長。
絕大多數細胞培養基不適宜高壓滅菌。因培養液中常含有維生素、蛋白質、多肽、生長因子等物質,這些物質在高溫或射線照射下易發生變性或失去功能,因而上述液體多采用過濾消毒以除去細菌??晒┻^濾滅菌使用的濾膜很多,其材料多為polyethersulphone(PES)、尼龍、多聚碳酸鹽、醋酸纖維素、硝酸纖維素、PTFE、陶瓷等。
2、膜過濾除菌是當前較為常用及便捷的一種方法,常采用0.2μm孔徑的濾膜,部份采用0.1μm孔徑。與高壓過濾方式相比,濾膜具有使用期限且價格較高,但對細胞培養基的營養成份破壞性較小。